Stanovení hemoglobinu v moči

Hemoglobin catalyzes, like peroxidase , the oxidation (dehydrogenation) of some substrates (eg benzidine derivatives ) by hydrogen peroxide:

$\mathrm {H} _{2}\mathrm {O} _{2}+\mathrm {H} _{2}\mathrm {A} \ {\xrightarrow[{\mathrm {nebo\ hemoglobin\ a\ jin{\acute {e}}\ l{\acute {a}}tky} }]{\mathrm {peroxid{\acute {a}}zy} }}\ 2\ \mathrm {H} _{2}\mathrm {O} +\mathrm {A}$

However, it is not an enzyme activity (catalysis is conditioned by heme iron) and therefore it is not lost even after heat denaturation. We are talking about pseudoperoxidase activity , which is used for sensitive but non-specific evidence of hemoglobin or trace amounts of blood. It is preferable to use a chromogenic substrate to monitor the reaction, i.e., a substance that provides a markedly colored product by dehydrogenation (often benzidine or its non-carcinogenic derivatives, aminophenazone, etc.).

The reagent zone of the diagnostic strips contains a chromogen (eg tetramethylbenzidine ) with stabilized hydrogen peroxide (eg cumene hydroperoxide ). In the presence of free hemoglobin ( hemoglobinuria ), the indication zone turns uniformly blue. If erythrocytes ( erythrocyturia ) are present in the urine , intensely green-blue dots to spots form.

Oxidation of tetramethylbenzidium

S hemoglobinurií se můžeme setkat u intravaskulární hemolýzy. K častější erytrocyturii vede jak poškození glomerulární membrány (glomerulární hematurie), tak krvácení z jakékoliv části vývodných cest močových. Často ji nacházíme u infekcí močových cest, urolitiázy a nádorů urogenitálního traktu.

Kromě hemoglobinu poskytuje pseudoperoxidázovou reakci i myoglobin, který se může do moči vylučovat při rozpadu kosterního svalstva (rabdomyolýza, crush-syndrom). Pozitivita zkoušky může být způsobena i peroxidázami leukocytů či některých bakterií, kvasinek nebo plísní, které se mohou vyskytovat v moči zejména při infekcích močových cest. Chceme-li vyloučit možnost falešně pozitivní reakce účinkem buněčných peroxidáz, je nutno reakci provádět s povařenou močí.

Kontaminace odběrové nádoby silnými oxidačními činidly rovněž vyvolává falešnou pozitivitu reakce. Na druhé straně může přítomnost silně redukujících látek (např. kyselina askorbová) zpomalit až zastavit pseudoperoxidázovou reakci a být tak příčinou falešně negativních výsledků.